第136期? 抗體純化利器--東曹Ca++Pure-HA羥基磷灰石層析介質

Ca++Pure-HA是一種由鈣和磷酸鹽組成的、用于分離生物分子的羥基磷灰石[Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂] 層析介質。Ca++Pure-HA顆粒，包括配基和填料骨架，都是由同一種材料來源同時形成，為工藝開發(fā)提供了無與倫比的選擇性和分辨率。其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。

雖然Ca++Pure-HA的選擇性和多相互作用模式顯示了廣泛的應用領域，但它最適合用于生物分子分離相關的應用。Ca++Pure-HA尤其適用于純化單克隆和多克隆抗體，分離抗體的多種亞型、同工酶，純化抗體片段，以及從雙鏈DNA中分離單鏈DNA。

? ? ? ?Ca++Pure-HA層析介質是大孔徑的球型羥基磷灰石六方晶體結構（圖1）。經過高溫燒結，提高了機械強度和化學穩(wěn)定性，能夠滿足工業(yè)規(guī)模的應用要求。Ca++Pure-HA的強大特性使其可在高流速和大型層析柱中重復循環(huán)使用。

圖1 Ca++Pure-HA的晶體結構

產品參數(shù)

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工作原理

與鈣基團的相互作用

※ 位于表面的鈣基團帶正電荷

※ Ca++Pure-HA 鈣基團的工作原理類似于陰離子交換

與磷酸基團的相互作用

※? Ca++Pure-HA的磷酸基團帶負電荷

※? 與磺酸基和羧基等陽離子交換介質一樣，Ca++Pure-HA的磷酸基團通過與帶正電荷的氨基殘基通過靜電相互作用結合強堿性物質

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應用

圖2 Ca++Pure-HA的動態(tài)吸附載量

如圖2所示，Ca++Pure-HA具有很高的動態(tài)吸附載量（DBC）。在5%的穿透率下，駐留時間為4分鐘時，對人IgG的DBC大于40g/L。

圖3使用 Ca++Pure-HA精純IgG樣品（來自Protein A純化后收集的組分）

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Ca++Pure-HA使用氯化物等洗脫緩沖溶液可有效去除mAb中的聚集體和降解物，如圖3所示。分析結果顯示單體峰和聚集體峰之間具有較高分辨率。

圖 4 使用Ca++Pure-HA純化前后IgG樣品的SEC分析

圖4顯示的是在Ca++Pure-HA上純化前后的SEC分析譜圖，聚集體和降解物明顯減少。HPLC分析的數(shù)據匯總如表1所示。

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表1 使用Ca++Pure-HA及KCl洗脫緩沖溶液減少的IgG聚集體和片段

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? ? ? ? ?Ca++Pure-HA在0.5mol/L NaOH中具有良好的耐堿性，即使超過65個CIP循環(huán)后，其動態(tài)吸附載量也沒有明顯降低（圖5）。圖中為使用1.0 mol/L NaOH，每經過5個CIP循環(huán)后測得的溶菌酶的動態(tài)吸附載量。

圖5 Ca++Pure-HA的耐堿性

Ca++Pure-HA層析介質具有卓越的分離特性以及無與倫比的選擇性和分辨率，可以在捕獲階段到最終精純的任何步驟中靈活應用，為純化工作者在分離生物分子時提供了更好的選擇。

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